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西安瑞豐儀器小編總結熒光顯微鏡成像質量的決定因素

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西安瑞豐儀器小編總結熒光顯微鏡成像質量的決定因素

發布日期:2021-04-23 作者: 點擊:

西安瑞豐儀器小編總結熒光顯微鏡成像質量的決定因素

熒光光學系統的成像質量主要取決于像的襯度和像的亮度,像的襯度是由樣品中激發出的熒光與背景上觀察到的光之比決定的。背景光包括透過截止激發光的濾色片的雜散激發光,樣品組織成分的自發熒光和光學系統的自發熒光和雜散光,在熒光顯微術中盡全力要解決的是既獲得較佳的像襯度,同時又維持像有足夠亮度,這兩者往往是矛盾的。例如用窄波帶濾色片激發時僅利用了極少的光能,背景暗了但熒光亮度也弱了。在應用時,只能兼顧,合理的權衡以決定取舍。

熒光顯微光學系統需要優先考慮的是:

(1) 光學系統組成的材料應選用在激發光波內無熒光材料,不但指光學系統玻璃也包括膠合制造中的膠合劑、切片、蓋玻片和浸液以及密封劑。若有自發熒光,不但會增加背景光,有時還會混淆觀察熒光圖像。

(2) 光學系統的參數選擇中, 應將獲得較大光能作為di一考慮因素。

大標本成像系統.jpg

照明系統中集光鏡應選用較大的包容角; 采用柯勒照明并使燈絲或弧光像充滿入瞳,以期望獲得高效率的均勻照明。

收集熒光成像的物鏡,因為像面照度與數值孔徑NA 2 成正式,為此作為熒光用物鏡應有較大的NA值。目前10×已達015;20×達0175;40×達019;油鏡40×達113。

雙目鏡筒作為熒光用時應在可見光譜段有較高的透過率,采用鍍膜技術可大大地減少光能的損失,它可比一般雙目鏡筒透射率提高一倍,這對弱熒光物質觀察是必須的。

目鏡放大率不宜選大,因為象面照度與目鏡放大率平方成反比。若其它條件相同,當用613×目鏡時,照度定為100% ,換上1215×時,照度約為25%,因此常在4×~ 613×之間選用。

(3) 作為熒光光學系統各組成部件的光譜特性也是至關重要的,特別是紫外光要通過的部件,如照明系統,聚光鏡以及物鏡,要關注紫光區的透射系數。聚光鏡要選用透紫外線的材料。照明系統中反光鏡表面鍍鋁比鍍銀好,因為鋁在UV 和V 區反射率在90% 以上,而銀僅達70%。加拿大膠吸收紫外線,在紫外區通過處不宜用作膠合劑。

本文網址:http://www.realfightchampionship.com/news/568.html

關鍵詞:大標本成像系統,大標本成像,標本成像

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