標本成像系統廠家介紹活體成像系統使用方法

標本成像系統廠家介紹活體成像系統使用方法

活體成像系統具有靈敏度高、直觀、操作簡單、能同時觀測多個實驗標本，無放射損害等優點，但也有其自身的缺陷，例如動物組織對光子吸收、空間分辨率較低等問題，因而活體成像系統仍需不斷地完善和改進。接下來標本成像系統廠家分享方法，我們一起看看。

1、制作動物模型

根據實驗需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法接種已標記的細胞或組織。在活體成像系統建模時應認真考慮實驗目的和選擇熒光標記，如標記熒光波長短，則穿透效率不高，建模時不宜接種深部臟器和觀察體內轉移，但可以觀察皮下瘤和解剖后臟器直接成像。深部臟器和體內轉移的觀察大多選用熒光素酶標記。

2、活體成像

小鼠經過常規麻醉(氣麻、針麻皆可)后放入成像暗箱平臺，活體成像系統軟件控制平臺的升降到一個合適的視野，自動開啟照明燈(明場)拍攝diyi次背景圖。然后，自動關閉照明燈，在沒有外界光源的條件下，拍攝由小鼠體內發出的特異光子。明場與暗場的背景圖疊加后可以直觀的顯示動物體內特異光子的部位和強度，完成成像操作。值得注意的是熒光成像應選擇合適的激發和發射濾片，生物發光則需要成像前體內注射底物激發發光。

3、數據處理

小動物活體成像系統圖像處理軟件除了提供含有光子強度標尺的成像圖片外，還能計算分析發光面積、總光子數、光子強度的相關參數供實驗者參考。

4、實驗影響因素

原則上，如預實驗時拍攝出圖片非特異性雜點多，需降低活體成像系統曝光時間;反之，如信號過弱可適當延長活體成像系統曝光時間。但曝光時間的延長，不僅增加了目的信號，對于背景噪音也存在一個放大效應。同一批實驗應保持一致的曝光時間，同時還應保持標本相對位置和形態的一致，從而減少實驗誤差。進行活體成像系統熒光成像時，實驗者可選擇背景熒光低不容易反光的黑紙放在動物標本身下，減少金屬載物臺的反射干擾。動物體內很多物質在受到激發光激發后，會發出熒光，產生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度。

背景熒光主要是來源于皮毛和血液的自發熒光，皮毛中的黑色素是皮毛中主要的自發熒光源，其發光光線波長峰值在500～520nm左右，在利用綠色熒光作為成像對象時，影響Z為嚴重，產生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度和特異性。動物尿液或其他雜質如沒有及時清除，成像中也會出現非特異性信號。

活體成像系統使用時，實驗者考慮到非特異性雜信號，以及成像圖片美觀等方面，可能會調節信號的閾值，因此在分析信號光子數或信號面積時，應考慮閾值的改變對實驗結果的影響。正確選擇ROI區域，可提高分析實驗數據的準確性。